SNB-19人膠質(zhì)瘤干冰細(xì)胞

【細(xì)胞縮寫(xiě)】 SNB-19細(xì)胞

【細(xì)胞名稱】 SNB-19(人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)

【背景資料】 見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

【細(xì)胞消化時(shí)注意把握消化時(shí)間，消化不夠會(huì)導(dǎo)致吹打細(xì)胞時(shí)造成損傷，一般消化時(shí)間是2-3分鐘，但以鏡檢時(shí)大部分細(xì)胞縮回球形為準(zhǔn)，一般2次即可將細(xì)胞吹打下來(lái)，消化不夠進(jìn)行細(xì)胞吹打易損傷細(xì)胞。細(xì)胞系的凍存液配方:90%FBS+10%DMSO，貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)】 細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外著名大學(xué)建系

【代次】 P4

【規(guī)格】 復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管(兩支)

【細(xì)胞數(shù)】 1*10(6)

【生物安全級(jí)別】 1

【生物體】 人

【組織來(lái)源】 膠質(zhì)

【細(xì)胞形態(tài)】 上皮狀

【細(xì)胞特性】 貼壁

【特別注意:如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)，如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決】

【細(xì)胞檢測(cè)】 細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

【培養(yǎng)條件】 詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

【傳代方法】 建議1:2-1:3 兩天換液一次

【凍存條件】 詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

【主要文獻(xiàn)】 請(qǐng)具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

幾種實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)基成分的作用:

1.NaHCO3的作用是什么?與CO2一起形成緩沖系統(tǒng)，保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定。

2.丙酮酸鈉的作用是什么?丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是如果沒(méi)有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM，-20℃保存，培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.

3.加入HEPES有何好處?培養(yǎng)基中常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營(yíng)養(yǎng)，但卻在生理PH值條件下會(huì)降低緩沖能力。而HEPES是一種很強(qiáng)的Buffer，加入HEPES能使細(xì)胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強(qiáng)。Hepes的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml*培養(yǎng)基中。

4.酚紅的作用是什么?酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值指示劑:中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。

5.谷氨酰胺的作用是什么?幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺都有膠高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20℃冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。

實(shí)驗(yàn)操作中常配制高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)，分裝使用，-20℃保存。使用時(shí)，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml*培養(yǎng)基中，使其終濃度為2mM培養(yǎng)基。

SNB-19人膠質(zhì)瘤干冰細(xì)胞

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