注意事項(xiàng)如下:
1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2 對(duì)于貼壁細(xì)胞,若細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開(kāi)封,用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉;如細(xì)胞還不貼壁,將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),直到問(wèn)題解決。
3 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和本公司技術(shù)部溝通交流。
我們?nèi)娜鉃槟?wù),提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,保障售后服務(wù),真心把客戶奉為上帝,及時(shí)處理客戶訂單,全程跟蹤貨源,采用誠(chéng)信快遞運(yùn)輸,認(rèn)真解答客戶疑問(wèn),對(duì)客戶售后問(wèn)題,不拖沓,不推卸責(zé)任,認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度。
停滯期(Stagnate Phase):細(xì)胞數(shù)量達(dá)飽和密度后,細(xì)胞遂停止增殖,進(jìn)入停滯期。此時(shí)細(xì)胞數(shù)量不再增加,故也稱(chēng)平頂期(Plateau)。停滯期細(xì)胞雖不增殖,但仍有代謝活動(dòng),繼而培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)漸趨耗盡,代謝產(chǎn)物積累、pH降低。此時(shí)需做分離培養(yǎng)即傳代,否則細(xì)胞會(huì)中毒,發(fā)生形態(tài)改變,重則從底物脫落死亡,故傳代應(yīng)越早越好。傳代過(guò)晚(已有中毒跡象)能影響下一代細(xì)胞的機(jī)能狀態(tài)。在這種情況下,雖進(jìn)行了傳代,因細(xì)胞已受損,需要恢復(fù),至少還要再傳1~2兩代,通過(guò)換液淘汰掉死細(xì)胞和使受損輕微的細(xì)胞得以恢復(fù)后,才能再用。結(jié)果反而耽誤了時(shí)間,這是在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)特別注意的。
四、原代培養(yǎng):即*次培養(yǎng),是指將培養(yǎng)物放置在體外生長(zhǎng)環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng),中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過(guò)程。有幾方面含義:
培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)器皿(瓶)中就不在分割,任其生長(zhǎng)繁殖;
原代培養(yǎng)中的“代”并非細(xì)胞的“代”數(shù),因?yàn)榕囵B(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞經(jīng)多次分裂已經(jīng)產(chǎn)生多代子細(xì)胞;
原代培養(yǎng)過(guò)程中不分割培養(yǎng)物不等于不更換培養(yǎng)液,也不等于不更換培養(yǎng)器皿。
正常細(xì)胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限,只有癌細(xì)胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能無(wú)限生長(zhǎng)下去。所謂轉(zhuǎn)化即是指正常細(xì)胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細(xì)胞。目前世界上許多實(shí)驗(yàn)室所廣泛傳用的HeLa細(xì)胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)而成。此細(xì)胞系一直延用至今。
原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不易傳下去了,細(xì)胞的生長(zhǎng)就會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。細(xì)胞株的遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變,在培養(yǎng)過(guò)程中其特征始終保持。當(dāng)細(xì)胞株傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”,不能再傳下去。但是有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變,并且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn),有可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制地傳代下去,這種傳代細(xì)胞稱(chēng)為細(xì)胞系。
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