BL-41細(xì)胞，伯基特淋巴瘤細(xì)胞

注意事項(xiàng)如下:

1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2 對(duì)于貼壁細(xì)胞，若細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉;如細(xì)胞還不貼壁，將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

3 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和本公司技術(shù)部溝通交流。

我們?nèi)娜鉃槟?wù)，提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，保障售后服務(wù)，真心把客戶奉為上帝，及時(shí)處理客戶訂單，全程跟蹤貨源，采用誠(chéng)信快遞運(yùn)輸，認(rèn)真解答客戶疑問，對(duì)客戶售后問題，不拖沓，不推卸責(zé)任，認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度。

停滯期(Stagnate Phase):細(xì)胞數(shù)量達(dá)飽和密度后，細(xì)胞遂停止增殖，進(jìn)入停滯期。此時(shí)細(xì)胞數(shù)量不再增加，故也稱平頂期(Plateau)。停滯期細(xì)胞雖不增殖，但仍有代謝活動(dòng)，繼而培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)漸趨耗盡，代謝產(chǎn)物積累、pH降低。此時(shí)需做分離培養(yǎng)即傳代，否則細(xì)胞會(huì)中毒，發(fā)生形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡，故傳代應(yīng)越早越好。傳代過晚(已有中毒跡象)能影響下一代細(xì)胞的機(jī)能狀態(tài)。在這種情況下，雖進(jìn)行了傳代，因細(xì)胞已受損，需要恢復(fù)，至少還要再傳1~2兩代，通過換液淘汰掉死細(xì)胞和使受損輕微的細(xì)胞得以恢復(fù)后，才能再用。結(jié)果反而耽誤了時(shí)間，這是在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)特別注意的。

四、原代培養(yǎng):即*次培養(yǎng)，是指將培養(yǎng)物放置在體外生長(zhǎng)環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng)，中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程。有幾方面含義:

培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)器皿(瓶)中就不在分割，任其生長(zhǎng)繁殖;

原代培養(yǎng)中的“代”并非細(xì)胞的“代”數(shù)，因?yàn)榕囵B(yǎng)過程中細(xì)胞經(jīng)多次分裂已經(jīng)產(chǎn)生多代子細(xì)胞;

原代培養(yǎng)過程中不分割培養(yǎng)物不等于不更換培養(yǎng)液，也不等于不更換培養(yǎng)器皿。

正常細(xì)胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限，只有癌細(xì)胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能無限生長(zhǎng)下去。所謂轉(zhuǎn)化即是指正常細(xì)胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細(xì)胞。目前世界上許多實(shí)驗(yàn)室所廣泛傳用的HeLa細(xì)胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)而成。此細(xì)胞系一直延用至今。

原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不易傳下去了，細(xì)胞的生長(zhǎng)就會(huì)出現(xiàn)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40~50代，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。細(xì)胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變,在培養(yǎng)過程中其特征始終保持。當(dāng)細(xì)胞株傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”，不能再傳下去。但是有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，并且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。

BL-41細(xì)胞，伯基特淋巴瘤細(xì)胞

T-47D細(xì)胞，人乳腺管癌細(xì)胞

CCD-1095Sk細(xì)胞，人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞

SK-BR-3*細(xì)胞，人乳腺腺癌細(xì)胞

SW 1353細(xì)胞，人軟骨肉瘤細(xì)胞

GNM 細(xì)胞，人上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞

T6細(xì)胞，人舌癌細(xì)胞

 TSCCA細(xì)胞，人舌鱗癌細(xì)胞

CAL 27細(xì)胞，人舌鱗癌細(xì)胞

Tca-8113細(xì)胞，人舌鱗癌細(xì)胞

TSCCa細(xì)胞，人舌鱗癌細(xì)胞

CRT 細(xì)胞，人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

U251細(xì)胞，人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

SH-SY5Y細(xì)胞，人神經(jīng)瘤細(xì)胞

BE(2)-M17細(xì)胞，人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

CRL-2268細(xì)胞，人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

IMR-32細(xì)胞，人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

SH-5Y5Y細(xì)胞，人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

SK-N-AS細(xì)胞，人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

SK-N-BE(2)細(xì)胞，人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

SK-N-MC細(xì)胞，人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞

A-498細(xì)胞，人腎癌細(xì)胞

A498-EGFP-puro細(xì)胞，人腎癌細(xì)胞

ACHN細(xì)胞，人腎癌細(xì)胞

KC細(xì)胞，人腎癌細(xì)胞

OS-RC-2細(xì)胞，人腎癌細(xì)胞

G-401細(xì)胞，人腎癌Wilms細(xì)胞

SK-NEP-1細(xì)胞，人腎母瘤細(xì)胞

SW-13細(xì)胞，人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞

NCI-H295R細(xì)胞，人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞

KP-N-NS細(xì)胞，人腎上腺神經(jīng)母瘤(腦轉(zhuǎn)移)細(xì)胞

NCI-H205細(xì)胞，人腎上腺腺瘤細(xì)胞

786-O(786-0)細(xì)胞，人腎透明癌細(xì)胞

CaKi-1細(xì)胞，人腎透明癌細(xì)胞

CaKi-2細(xì)胞，人腎透明癌細(xì)胞

786-0細(xì)胞，人腎透明腺癌細(xì)胞

ACHN細(xì)胞，人腎透明腺癌細(xì)胞

769-P細(xì)胞，人腎腺癌細(xì)胞

HuTu-80細(xì)胞，人十二脂腸腺癌細(xì)胞

CaES-17細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

EC9706細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

Eca-109細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

KYSE150細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

TE-1細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

原代培養(yǎng)是建立各種細(xì)胞系(株)必經(jīng)的階段，其是否成功與組織污染與否、供體年齡、培養(yǎng)技術(shù)和方法、適宜培養(yǎng)基的選擇等多種因素有關(guān)。由于原代培養(yǎng)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化性極小，對(duì)病毒敏感性好，因此適應(yīng)制備疫苗等生物制品;但也存在有潛在外源因子、不能事先檢查標(biāo)本、且受供體年齡健康狀況的影響而導(dǎo)致批間差異大等缺陷。目前常用的原代細(xì)胞培養(yǎng)有雞胚成纖維細(xì)胞及豬腎、猴腎、地鼠腎等原代細(xì)胞。

原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種、加培養(yǎng)液、置培養(yǎng)條件下培養(yǎng)等步驟，在所有的操作過程中，都必須保持培養(yǎng)物及生長(zhǎng)環(huán)境的無菌。

多數(shù)情況下，分散的細(xì)胞若屬于貼壁依賴型細(xì)胞，就能黏附、鋪展于培養(yǎng)器皿和載體表面生長(zhǎng)而形成細(xì)胞單層，這種培養(yǎng)方式稱為單層細(xì)胞培養(yǎng)(monolayer culture)，又叫貼壁培養(yǎng)(adherent culture)。少數(shù)情況下，培養(yǎng)的細(xì)胞沒有貼壁依賴性，可通過專門設(shè)備使細(xì)胞始終處于懸狀態(tài)而在體外生長(zhǎng)，這種形式稱為懸浮培養(yǎng)(suspension culture)。如何讓接種的細(xì)胞盡快貼壁，是決定培養(yǎng)成功的關(guān)鍵步驟:

取決于適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)基質(zhì)表面;

可降低接種后培養(yǎng)液對(duì)細(xì)胞的浮力，如先少補(bǔ)加少量培養(yǎng)液，待細(xì)胞貼壁后再補(bǔ)足營(yíng)養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);

注意適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種密度，一般10⁵個(gè)/ml左右。

五、傳代培養(yǎng):當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)和細(xì)胞不斷分裂，一則細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長(zhǎng)速度減慢甚至停止;另一方面也會(huì)因營(yíng)養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長(zhǎng)或發(fā)生中毒。此時(shí)就需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)。這個(gè)過程就稱為傳代(passage)或者再培養(yǎng)(subculture)。對(duì)單層培養(yǎng)而言，80%匯合或剛匯合的細(xì)胞是較理想的傳代階段。

體外培養(yǎng)技術(shù)中所謂的傳“代”概念并不等于細(xì)胞生物學(xué)中“親代細(xì)胞”與“子代細(xì)胞”中“代”的概念。傳代培養(yǎng)的實(shí)質(zhì)就是分割后再一次培養(yǎng)，可以相對(duì)地衡量培養(yǎng)物的培養(yǎng)年齡。

六、生長(zhǎng)曲線:細(xì)胞接種入培養(yǎng)瓶后，先進(jìn)入2-24h的延遲期(lag period)，然后進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期(即對(duì)數(shù)期)(log phase)，匯合成單層進(jìn)入緩慢生長(zhǎng)或停滯期(即平臺(tái)期)(plateau lhase)。每種細(xì)胞系(cell line)的這些生長(zhǎng)期(growth phase)都是特征性的，只要環(huán)境條件保持恒定，每一次測(cè)定結(jié)果應(yīng)該是可重復(fù)的。