TC-1小鼠肺上皮細胞
細胞別名:TC-1細胞;小鼠肺上皮細胞 小鼠肺上皮細胞;TC-1細胞
生物安全水平:1
培養(yǎng)基&血清:見培養(yǎng)條件
生物體:小家鼠(小鼠)
來源:器官:肺
細胞接收后的操作流程與注意事項:
1、如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂、漏液等情況,請及時做好照片記錄并聯(lián)系我們。
2、擰松瓶蓋,細胞瓶豎立培養(yǎng)8h(或到第二天)
3、待細胞沉底后吸除上層液體(含碎片殘渣,請小心操作),然后吸取沉底的細胞層(2ml左右)轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶。
4、加入新鮮的*培養(yǎng)基(如細胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%)繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)
1、將培養(yǎng)瓶/皿中的細胞重懸混勻。
2、吸取2/3或者一半混勻后的細胞懸液到新的培養(yǎng)瓶/皿。
3、分別在原瓶/皿和新分瓶的培養(yǎng)瓶/皿加入等量或者2倍的新鮮培養(yǎng)基,使細胞密度保持5×10(5)/ml左右。
4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況和細胞密度,定期半量換液(每周2-3次),待細胞密度大于2×10(6)/ml以后重復(fù)1項操作或者凍存。
相關(guān)細胞資料:
培養(yǎng)條件:GIBCO(1640+10%胎牛血清)
培養(yǎng)環(huán)境:95%空氣;5%二氧化碳(CO2)
溫度:37.0℃
保存:凍存血清:95%*培養(yǎng)基;5%二甲基亞砜(DMSO)
儲存溫度:液氮
實驗要點及說明
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)*的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
TC-1小鼠肺上皮細胞
細胞處理方法:
一、貼壁細胞
1、 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基,到50ml離心管中,剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代,如沒有達到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細胞,對50ml上清進行離心收集細胞,如果細胞連片狀態(tài),棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化(1ml胰酶37度),接種培養(yǎng)。
二、懸浮細胞
1、接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5、1000rpm,5min 離心,用吸管小心吸出上清,加入培養(yǎng)基,重懸細胞。
6、將重懸好的細胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細胞培養(yǎng)瓶種,加入新鮮培養(yǎng)基,置于 37℃,5%CO2 培養(yǎng)(大部分細胞)。